Estudio del polimorﬁsmo del promotor del gen de la IL-6 en pacientes con sobrecarga de hierro primaria

ARTÍCULO ORIGINAL

Estudio del polimorﬁsmo del promotor del gen de la IL-6 en

pacientes con sobrecarga de hierro primaria

Tetzlaff, Walter Francisco *; Meroño, Tomás ; Sorroche, Patricia ; Boero, Laura ; Martín, Maximiliano ; Botta, Eliana ; Castro,

Marcelo ; Frechtel, Gustavo ; Rey, Jorge ; Daruich, Jorge ; Cerrone, Gloria ; Brites, Fernando Daniel

Laboratorio de Lípidos y Aterosclerosis, Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Instituto

de Fisiopatología y Bioquímica Clínica (INFIBIOC), Universidad de Buenos Aires (UBA). Consejo Nacional de Investigaciones

Cientíﬁcas y Técnicas (CONICET). Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

Laboratorio Central, Hospital Italiano de Buenos Aires. Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

Servicio de Hemoterapia, Hospital de Clínicas “José de San Martín”, Facultad de Medicina, Instituto de Fisiopatología y

Bioquímica Clínica (INFIBIOC), Universidad de Buenos Aires (UBA). Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

Cátedra de Genética y Biología Molecular, Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo (INIGEM-CONICET), Facultad

de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires (UBA). Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

Servicio de Gastroenterología, Hospital de Clínicas “José de San Martín”, Universidad de Buenos Aires (UBA). Ciudad

Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

Contacto: Walter Francisco Tetzlaff. E-mail: waltertetzlaff@gmail.com

La sobrecarga de hierro (SH) primaria ha sido vinculada a un estado proinﬂamatorio y a mayor riesgo

Resumen

de enfermedad cardiovascular (ECV). Entre los marcadores de inﬂamación asociados a ECV, se destacan

la proteína C reactiva ultrasensible (PCRus) y la interleuquina 6 (IL-6). Existe una variante polimórﬁca de

nucleótido simple (SNP) en la posición -174 (G/C) del promotor del gen de la IL-6, que regula su transcrip-

ción. El objetivo de este trabajo fue valuar el SNP -174 G/C y su interacción con marcadores de inﬂama-

ción, con factores de riesgo y biomarcadores de ECV en pacientes con SH primaria y controles. Se estu-

diaron 37 pacientes de sexo masculino con SH primaria en comparación con controles pareados por sexo

y edad. Se determinó la concentración de PCRus por inmunoturbidimetría ultrasensible automatizada y

la de IL-6 por enzimoinmunoensayo. Se evaluó el SNP-174 G/C por PCR-RFLP. Se encontraró que la PCRus

fue mayor y la IL-6 menor en los pacientes en comparación con los controles. El análisis del polimorﬁsmo

del SNP-174 G/C mostró frecuencias genotípicas signiﬁcativamente diferentes entre pacientes (43% CC,

43% CG y 14% GG) y controles (10% CC, 41% CG y 49% GG) (OR = 4,09, IC 95% = 2,06 - 8,13, p < 0,0001), en

los que se encontró equilibrio de Hardy-Weinberg. El análisis de regresión logística múltiple reveló, que la

SH se asociaba en forma independiente y signiﬁcativa, a la homocigosis CC (OR: 7,05; p < 0,01; IC 95%:

1,66 – 29,86) y luego, a la ferremia. Se concluyó que los pacientes con SH primaria presentaron mayor

frecuencia del alelo C en el promotor del gen de la IL-6, lo que condicionaba la presencia de menores

niveles de IL-6. A través de su relación con la expresión de hepcidina, la disminución de IL-6 acentuaría

las alteraciones del metabolismo del hierro en los pacientes con SH, los cuales presentaron un estado

proinﬂamatorio caracterizado por aumento de PCRus.

Palabras clave: Sobrecarga de hierro, inﬂamación, IL-6, polimorﬁsmo, enfermedad cardiovascular.

Primary iron overload (IO) has been linked to a pro-inﬂammatory state and to increased risk of

cardiovascular disease (CVD). Among the markers of inﬂammation associated with CVD, high sensitive

C-reactive protein (hsCRP) and interleukin 6 (IL-6) are the most relevant. The gene promoter of IL-6

has a single nucleotide polymorphism (SNP) on position -174 (G/C), which regulates its transcription.

The aim of this study was to o evaluate the SNP -174 G/C and its interaction with risk factors and

biomarkers of CVD in patients with primary IO and controls. Thirty-seven men diagnosed with primary

IO were studied and compared with sex and age-matched controls. HsCRP concentration was evaluated

by automated high sensitive immunoturbidimetric assay and IL-6 by enzyme immunoassay. SNP -174

G/C was evaluated by PCR-RFLP. HsCRP was higher and IL-6 lower in patients compared to controls. The

genotyping of the SNP -174 G/C showed signiﬁcantly different genotype frequencies between patients

Abstract

(43% CC, 43% CG and 14% GG) and controls (10% CC, 41% CG and 49% GG) (OR = 4.09, 95% CI = 2.06

to 8.13, p < 0.0001), being in Hardy-Weinberg equilibrium. The multiple logistic regression analysis

ByPC 2016;80(3):10-17.

Estudio del polimorﬁsmo del promotor del gen de la IL-6 en pacientes con sobrecarga de hierro primaria

showed that IO was independently and signiﬁcantly associated, ﬁrstly, with the CC homozygosis (OR:

.05, p < 0.01; IC 95%: 1.66 – 29.86) and then with serum iron. It was concluded that patients patients

ISSN 1515-6761 Ed. Impresa with primary IO presented higher frequency of the C allele in IL-6 gene promoter, thereby conditioning

ISSN 2250-5903 Ed. CD-ROM

Código Bibliográﬁco: RByPC

the presence of lower circulating IL-6. Through its relationship with the expression of hepcidin,

Fecha de Recepción:

4/09/2015.

Fecha de aceptación:

8/01/2016

decreased IL-6 would deepen the alterations of iron metabolism in patients with IO, who presented a

pro-inﬂammatory state characterized by increased hsCRP levels.

Keywords: Iron overload, inﬂammation, IL-6, polymorphism, cardiovascular disease.

Introducción

SH, las mutaciones asociadas y el riesgo de ECV se encuen-

La sobrecarga de hierro primaria abarca un grupo de en- tran escasamente deﬁnidas.

fermedades hereditarias que afectan el metabolismo del

En la actualidad, la ECV aterosclerótica es concebida como

hierro, provocando su acumulación en distintos órganos y una enfermedad inﬂamatoria de la vasculatura en la que di-

sistemas . En estas condiciones hereditarias, la expresión versos factores y condiciones están asociados a un desarro-

19, 20

y/o regulación de proteínas y hormonas relacionadas con el llo temprano de la patología

metabolismo del hierro pueden estar afectadas.¹^,³

léculas propias del proceso inﬂamatorio son plausibles de ser

. Por lo tanto, numerosas mo-

La causa principal de la SH primaria es la presencia de mu- utilizadas como biomarcadores o factores de riesgo de ECV.

taciones en el gen HFE, las cuales se encuentran presentes Entre ellos, cabe destacar a la interleuquina 6 (IL-6) por la di-

en aproximadamente 1 de cada 200 sujetos caucásicos . El versidad de actividades que puede llevar a cabo. De hecho, la

gen HFE participa en la regulación de la expresión de la hep- IL-6 es una citoquina pleiotrópica implicada en la regulación

cidina por los hepatocitos. Fisiológicamente, la hepcidina ac- de la reacción inﬂamatoria de fase aguda, en la respuesta in-

túa en respuesta a un aumento del hierro en circulación, blo- mune y en la hematopoyesis. Es una glicoproteína producida

queando su salida desde los sitios de depósito, a través de la principalmente por macrófagos, leucocitos y, en algunos ca-

degradación de la proteína ferroportina . Consecuentemente, sos, por células endoteliales, del estroma del timo o de la mé-

21,22

en la SH primaria, el déﬁcit de hepcidina causa un aumento dula ósea

. La IL-6 está involucrada en la respuesta sisté-

desregulado de la absorción del hierro dietario y genera de- mica a la inﬂamación, tanto en el sistema nervioso, como en

fectos en su almacenaje .

el hígado y la médula ósea.

La SH primaria se caracteriza por la observación histológi-

El gen que codiﬁca la IL-6 se localiza en el brazo corto del

ca de siderosis hepatocelular. Entre las mutaciones del gen cromosoma 7 (7p21). En 1998, se describió por primera vez

HFE que conducen a SH, la más común en la población anglo- una variante polimórﬁca de nucleótido simple (SNP) en el

sajona es la C282Y . En contraste, en nuestro país, un estu- promotor de este gen, consistente en el reemplazo de una

dio de screening, que evaluó la presencia de mutaciones en el guanina por una citocina en la posición -174

gen HFE reveló que la mutación H63D era la más prevalente,

Múltiples estudios llevados a cabo con la ﬁnalidad de

seguida por las mutaciones S65C y C282Y . Es de notar que evaluar la frecuencia de los polimorﬁsmos del promotor del

hasta el momento no se han descripto diferencias signiﬁcati- gen de la IL-6 en distintos grupos étnicos, así como la aso-

vas en el curso clínico de la enfermedad entre pacientes con ciación entre estos polimorﬁsmos y la presencia y carac-

distintos genotipos.⁷. Alteraciones frecuentes asociadas a terísticas de diferentes enfermedades. Así, se observaron

SH son las artropatías, la diabetes, la hiperpigmentación y las asociaciones entre la presencia del alelo G y la existencia de

hepatopatías, entre otras.

A partir del planteo de la hipótesis del hierro-corazón de Su- tipo 2 y obesidad, cuadros caracterizados por altos niveles

procesos inﬂamatorios, resistencia a la insulina, diabetes

llivan , se ha comenzado a estudiar la relación entre los nive- de IL-6²³^-²⁷.

les de hierro y el riesgo de enfermedad cardiovascular (ECV).

Los objetivos del presente estudio fueron evaluar el poli-

Originalmente, Sullivan postuló un efecto protector de la de- morﬁsmo del promotor del gen de la IL-6 y su interacción con

pleción de hierro y, luego, se realizaron diversos estudios para los parámetros ferrocinéticos, las alteraciones metabólicas,

demostrar una asociación positiva entre la SH o el aumento los marcadores de inﬂamación y los factores de riesgo y bio-

de la concentración de ferritina y el riesgo de ECV. Mientras marcadores de ECV en pacientes con SH primaria y controles.

que algunos de estos estudios demostraron un mayor efecto

en hombres, e inclusive una interacción entre el hierro y los Materiales y métodos

niveles de colesterol de las lipoproteínas de baja densidad

C-LDL), el tema aún resulta controvertido¹¹^-¹⁴. Por otro lado, Diseño del estudio

Estudio transversal en pacientes con SH primaria y suje-

(

estudios en pacientes con SH describieron asociaciones en-

tre la concentración de ferritina y el aumento de marcadores tos controles de sexo masculino.

15-17

de inﬂamación, disfunción endotelial y aterosclerosis

No obstante, un meta análisis reciente no detectó asociación Sujetos

signiﬁcativa entre la presencia de la mutación C282Y del gen

Se estudiaron 37 pacientes con SH primaria provenientes

HFE y el riesgo de ECV¹. Por lo tanto, las relaciones entre la del Servicio de Hepatología, División Gastroenterología, Hos-

ByPC 2016;80(3):10-17.

Estudio del polimorﬁsmo del promotor del gen de la IL-6 en pacientes con sobrecarga de hierro primaria

pital de Clínicas “José de San Martín”, Universidad de Buenos Determinaciones bioquímicas generales

Aires y 37 sujetos controles. Todos los participantes del es-

Se analizó el hemograma completo en un autoanalizador

tudio fueron adultos (> 20 años) de sexo masculino. Para el Coulter GEN S® (BeckmanCoulter, Fullerton, CA, EEUU). Se

diagnóstico de SH primaria, se utilizó la técnica patrón, la cual midieron las concentraciones de Tf, apoproteína (apo) A-I y

implica la visualización directa de un aumento de los depó- apo B por inmunonefelometría (IMMAGE®, BeckmanCoulter,

sitos de hierro, con distribución hepatocelular en una mues- Fullerton, CA, EEUU) y la concentración sérica de ferritina

tra de tejido obtenida por punción hepática. Además, los pa- mediante un ensayo automatizado de electroquimiolumi-

cientes con SH presentaron alteraciones en los parámetros niscencia (VITROS® ECiQ, Ortho-Clinical Diagnostics, Raritan

ferrocinéticos [saturación de transferrina (Tf) > 50 % y con- City, NJ, EEUU). Se determinaron los niveles de hierro, glu-

centración sérica de ferritina > 300 ng/ml]. Se excluyeron del cosa, urea, creatinina, ácido úrico, triglicéridos , colesterol

estudio aquellos pacientes que presentaban:

a) diagnóstico previo de diabetes,

b)hepatitis virales agudas o crónicas,

c) serología positiva para HIV,

d) neoplasias,

total (TC) y el hepatograma completo por métodos estanda-

rizados (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania). La satu-

ración de Tf se determinó por cálculo. Se midió el colesterol

de las lipoproteínas de alta densidad (HDL) aisladas en el

sobrenadante obtenido luego de la precipitación selectiva

de las lipoproteínas con apo B habiendo utilizando como

reactivo precipitante 0,44 mmol/l ácido fosfotúngstico en

e) enfermedades tiroideas o renales,

f) cirrosis,

g) cualquier enfermedad para la que se encontrase contrain- presencia de iones magnesio (Roche Diagnostics, Mannhe-

dicado el tratamiento por ﬂebotomía,

h) cáncer,

im, Alemania). Se evaluó el nivel de colesterol de las lipopro-

teínas de baja densidad (LDL) como la diferencia entre el CT

i) consumo excesivo de tabaco (> 10 cigarrillos/día) o alco- y el colesterol contenido en el sobrenadante obtenido des-

hol (> 40 g/día), y

pués de la precipitación selectiva de LDL con 10 g/l polivinil

j) tratamiento con beta-bloqueantes, inhibidores de la en- sulfato en polietilenglicol (600 Da; 2,5% P/V; pH 6,7) (Wiener

zima convertidora de angiotensina, diuréticos tiazídicos, lab Group, Rosario, Argentina).

antioxidantes u otras drogas que pudiesen afectar el me-

tabolismo glucídico o lipídico.

También, se incluyeron sujetos sanos voluntarios como

Marcadores de inﬂamación

La concentración de PCRus se midió por un ensayo in-

grupo control que fueron pareados por sexo y edad. Se obtuvo munoturbidimétrico ultrasensible (Roche Diagnostics,

el consentimiento informado por escrito de todos los indivi- Mannheim, Alemania) y los niveles de IL-6 por método de

duos ingresados al estudio. El presente proyecto fue apro- enzimoinmunoensayo (ELISA), empleando un kit comercial

bado por el Comité de Ética del Hospital de Clínicas “José de que utiliza anticuerpos monoclonales especíﬁcos para IL-6

San Martín” y el Comité de Ética de la Facultad de Farmacia y humana (eBioscience, CA, EEUU). Todas las muestras de los

Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.

pacientes y controles fueron evaluadas en un sólo ensayo

con la ﬁnalidad de evitar la variabilidad interensayo.

Protocolo de estudio y muestras

Se extrajo sangre de la vena antecubital entre las 08:00 y Genotipiﬁcación del gen HFE

1:00 hs, luego de 12 horas de ayuno. Las muestras fueron

En los pacientes con SH, a partir de sangre entera perifé-

colocadas en tubos secos. Para la obtención de suero, los rica, se puriﬁcó el ADN genómico por el método bromuro de

tubos fueron centrifugados a 3.500 rpm durante 15 minu- cetil-trimetilamonio (CTAB) . La genotipiﬁcación se llevó a

tos a 4º C. Se guardaron alícuotas a 4º C para las determi- cabo mediante la técnica de reacción en cadena de la polime-

naciones bioquímicas generales, que fueron realizadas en rasa y el análisis de la longitud de los fragmentos de restric-

un período menor a 24 horas, y a –70º C para la evaluación ción (PCR-RFLP) . La reacción de ampliﬁcación se realizó con

de los otros parámetros estudiados. Asimismo, se empleó un volumen ﬁnal de 25 µl, usando la siguiente mezcla: 4,5 µl

sangre entera anticoagulada con NA EDTA para la determi- de buffer 10X (Promega, CA, EEUU), 2,2 µl de dNTPs (Prome-

nación del hemograma, la genotipiﬁcación del gen HFE y la ga, CA, EEUU), 0,4 µl de primers (Invitrogen, NY, EEUU), 1,2 µl

evaluación del SNP -174 G/C del promotor del gen de la IL-6. de ADN TaqPolimerasa (Promega, CA, EEUU), 10,7 µl de agua

Milli-Q, y 6 µl de ADN genómico. Los primers utilizados con-

Características clínicas

tra los exones 2 y 4 del gen HFE fueron: para C282Y, forward

En todos los pacientes, se evaluaron signos y síntomas tí- 5-TGGCAAGGGTAAACAGATCC-3 y reverse 5-CTCAGGCACTCCTCT-

picos de la patología en estudio. Tanto a los pacientes como a CAACC-3; y para H63D, forward 5-ACATGGTTAAGGCCTGTTGC-3 y

los controles, se les efectuó una anamnesis exhaustiva y se reverse 5-GCCACATCTGGCTTGAAATT-3

les midió el peso y la altura con prendas livianas y sin calzado.

El ciclado (Axygen® MaxyGene™ II ThermalCycler, CA, EEUU)

Se calculó el índice de masa corporal (IMC) como el peso / al- consistió en una desnaturalización inicial a 95° C durante 5

tura . También, se midió la circunferencia de la cintura a nivel minutos y en 30 ciclos de desnaturalización a 95° C durante

de la zona umbilical con una cinta métrica no distensible.

30 segundos, annealing a 58° C durante 30 segundos, y elon-

ByPC 2016;80(3):10-17.

Estudio del polimorﬁsmo del promotor del gen de la IL-6 en pacientes con sobrecarga de hierro primaria

gación a 72° C durante 1 minuto. El producto ampliﬁcado de la rencias ajustadas fueron analizadas por ANCOVA. Se empleó

PCR presentó dos sitios de corte con el empleo de las enzimas además análisis de regresión logística múltiple. En todos los

Rsa I (mutación C282Y, Promega, WI, EEUU) y Bcl I (mutación casos, las pruebas se consideraron signiﬁcativas con un p <

H63D, Promega, WI, EEUU). Los productos de la digestión se 0,05 en la situación bilateral. Para los análisis estadísticos se

sometieron a electroforesis en gel de agarosa al 3 % p/v du- utilizaron los programas INFOSTAT (Grupo INFOSTAT, Univer-

rante 1 hora, luego se tiñó el gel con bromuro de etidio y se sidad Nacional de Córdoba, Córdoba, Argentina) y SPSS 19.0

visualizó con un transiluminador UV. El genotipo fue asignado (IBM, Chicago, Ill, EEUU).

acorde a los patrones de corte observados.

Resultados

Genotipiﬁcación del SNP -174 G/C del promotor del

En un grupo de 37 pacientes de sexo masculino con SH

primaria y en 37 controles pareados por sexo y edad [50

gen de la IL-6

A partir de sangre entera periférica, se puriﬁcó el ADN ge- (35 - 61) vs. 46 (35 - 55) años, respectivamente; p no signi-

nómico por el método CTAB . El SNP -174 G/C del promotor ﬁcativo], se evaluaron parámetros bioquímicos generales,

del gen de la IL-6 se genotipiﬁcó por PCR-RFLP con el empleo indicadores del metabolismo del hierro, perﬁl de lípidos y li-

de un termociclador Axygen® MaxyGene™ II (CA, EEUU). La re- poproteínas, marcadores del estado inﬂamatorio, presencia

acción de ampliﬁcación se realizó en un volumen total de 15 de diferentes mutaciones en el gen HFE y el SNP -174 G/C

µl conteniendo: 500 ng de ADN genómico, 3 µl de buffer 5X del promotor del gen de la IL-6.

(

Promega, CA, EEUU), 200 µM de dNTPs (Promega, CA, EEUU),

0 pmoles de cada primer (Invitrogen, NY, EEUU), 1 U de GoTa- Parámetros bioquímicos generales y marcadores de

qPolimerasa (Promega, CA, EEUU), y agua destilada. Se dise- inﬂamación en pacientes con SH y sujetos controles

ñó un juego de primers especíﬁcos que ﬂanquean la secuen- Los pacientes con SH presentaron mayor IMC que los con-

cia del SNP -174 G/C del promotor del gen de la IL-6: forward troles (28,2 ± 3,2 vs. 23,1 ± 2,4 kg/m2, respectivamente; p

’-TGAAGTAACTGCACGAAATTTGAGG-3’ y reverse 5’-TGCAATGT- < 0,0001). Por tal motivo, los análisis subsiguientes fueron

GACGTCCTTTAGCAT-3’ . El ciclado consistió en una desnatu- realizados ajustando por esta variable. Como era esperado,

ralización inicial a 94° C durante 3 minutos y en 30 ciclos de los marcadores del metabolismo del hierro se encontraron

desnaturalización a 94° C durante 1 minuto, annealing a 50° signiﬁcativamente aumentados en los pacientes con SH,

C durante 30 minutos, y elongación a 72° C durante 1 minuto,

con una extensión ﬁnal de 10 minutos a 72° C. La presencia

del alelo G genera un sitio de corte para la enzima SfaNI . La

Tabla I. Características bioquímicas generales de los

pacientes con SH y los sujetos controles.

digestión se realizó en un volumen total de 15 µl que contenía

Pacientes

con SH

Sujetos

controles

(n = 37)

1,5 µl de buffer 10X (BioLabs, NE, EEUU), 0,1 U de SfaNI (Bio-

Labs, NE, EEUU), 8,4 µl de agua Milli-Q, y 5 µl de producto de

PCR a 37° C overnight. Los productos de la digestión se some-

tieron a electroforesis en gel de agarosa al 1,5 % p/v durante

(

n = 37)

Gr (10 cél/ml)

5,0 ± 0,3

7 ± 2

5,0 ± 0,5

7 ± 2

Gb (10 cél/ml)

horas, luego se tiñó el gel con bromuro de etidio durante 10

Hematocrito (%)

45 (43 – 47)

45 (43 – 46)

minutos y se visualizó con un transiluminador UV. El genotipo

fue asignado acorde a los patrones de corte observados.

Hemoglobina

15 (14 – 16)

16 (15 – 16)

(g/dl)

Análisis estadístico

Ferremia (ug/dl) 141 (105 – 176) 86 (73 – 111) <0,0001

Se analizó la distribución de las distintas variables por el

método de Shapiro-Wilks. Las variables con distribución nor-

mal fueron expresadas como media ± desvío estándar (DE)

y las de distribución no paramétrica como mediana (rango

intercuartil). Las frecuencias alélicas y génicas fueron anali-

zadas mediante el test Chi cuadrado (χ2). Las diferencias en-

tre variables continuas con distribución paramétrica fueron

analizadas con el test T de Student para muestras indepen-

Saturación Tf (%)

47 (33 – 65)

26 (24 – 31)

86 (61 – 166)

21 (17 – 23)

19 (18 – 26)

63 (49 – 74)

<0,0001

<0,05

Ferritina (ng/ml) 246 (68 – 558)

ASAT (UI/I)

ALAT (UI/I)

FAL (UI/I)

29 (23 – 39)

38 (23 – 49)

68 (55 – 87)

<0,0001

<0,0005

Bilirrubina Total

0,9 (0,6 – 1,0)

0,6 (0,6 – 0,9)

(mg/dl)

dientes. Cuando las variables presentaron una distribución ꢀSH, sobrecarga de hierro; Gr, glóbulos rojos; Gb, glóbulos

no paramétrica, las diferencias fueron evaluadas empleando

el test U de Mann-Whitney. Las correlaciones simples fueron

realizadas por los métodos de Pearson y Spearman, acorde a

la distribución de las variables. En los casos en los que se eva-

luaron diferencias de grupos ajustadas, correlaciones parcia-

les y regresiones lineales, se normalizaron las variables no

paramétricas antes de ser incluidas en los análisis. Las dife-

blancos; Tf, transferrina; ASAT, aspartatoaminotransferasa;

ALAT, alaninaaminotransferasa; FAL, fosfatasa alcalina; NS,

no signiﬁcativo. Los resultados están expresados como

media ± desvió estándar (DE) o mediana (Q1-Q3) para

variables con distribución paramétrica y no paramétrica,

respectivamente. Análisis efectuado mediante el ajuste

por índice de masa corporal.

ByPC 2016;80(3):10-17.

Estudio del polimorﬁsmo del promotor del gen de la IL-6 en pacientes con sobrecarga de hierro primaria

respecto a los controles, como así también los marcadores Análisis del SNP -174 G/C del promotor del gen de la

de daño hepático (Tabla I).

IL-6 en pacientes con SH y sujetos controles

De acuerdo al rol del hierro en las alteraciones del hepatogra-

La distribución genotípica y alélica del SNP -174 G/C del pro-

ma, la saturación de Tf correlacionó con los niveles de bilirrubina motor del gen de la IL-6 se muestra en la tabla III. Ambas pobla-

total (r = 0,49; p < 0,0005) y las actividades de ASAT (r = 0,42;

p < 0,005) y ALAT (r = 0,26; p < 0,01). A su vez, también hubo

correlación con los niveles de ferritina (r = 0,46; p < 0,0001).

El perﬁl de lípidos y lipoproteínas de los pacientes con SH y

los sujetos controles se muestra en la tabla II. Sólo, se detectó

una leve disminución del colesterol total y del C-LDL en pacien-

tes con SH.

Además, se observó que los niveles de los marcadores de in-

ﬂamación crónica, PCRus e IL-6, presentaron diferencias entre

pacientes y controles, siendo que la PCRus estaba aumentada

Figura 1.

PCRus

3,0

2,3

1,5

0,8

0,0

(OR = 5,56; IC95% = 3,93 - 7,76; p < 0,05) y la IL-6 disminuida

(OR = 1,59; IC95% = 0,51 - 4,95; p < 0,05) en los pacientes con

SH (Figura 1).

Análisis del gen HFE en pacientes con SH

Del grupo de pacientes (n = 37), 27 (73%) presentaron algu-

na de las mutaciones evaluadas en el gen HFE (Figura 2). Once

fueron homocigotas y 2 heterocigotas para la mutación C282Y.

Por otro lado, 2 pacientes fueron homocigotas y 9 heterocigotas

para la mutación H63D del mismo gen, mientras que sólo 3 pa-

cientes fueron doble heterocigotas H63D/C282Y. Por último, 10

pacientes no presentaron ninguna mutación (Figura 2).

Pacientes con SH

Controles

IL-6

2,0

1,5

Tabla II. Perﬁl de lípidos y lipoproteínas de los pacientes

1,0

con SH y los sujetos controles.

Pacientes

con SH

Sujetos

controles

(n = 37)

0,5

(

n = 37)

TG (mg/dl)

97 (78 – 147)

176 ± 35

88 (70 – 117)

191 ± 29

< 0,05

0,0

Pacientes con SH

Controles

CT (mg/dl)

ꢀ

Concentraciones plasmáticas de PCRus (Panel A) e IL-6 (Pa-

nel B) en pacientes con SH (n = 37) y sujetos controles (n =

7). PCRus, proteína C reactiva ultrasensible; IL, interleuqui-

C-VLDL (mg/dl)

C-LDL (mg/dl)

C-HDL (mg/dl)

CT/ C-HDL

18 (16 – 26)

109 ± 31

19 (16 – 22)

123 ± 27

< 0,05

45 ± 10

48 ± 10

na; SH, sobrecarga de hierro. * p < 0,05 vs. controles.

3,8 (3,3 – 5,0)

85 ± 26

4,1 (3,3 – 5,0)

93 ± 18

Apo B (mg/dl)

Apo A-I (mg/dl)

ALAT (UI/I)

Figura 2.

130 ± 19

137 ± 20

38 (23 – 49)

68 (55 – 87)

19 (18 – 26) <0,0005

FAL (UI/I)

63 (49 – 74)

Bilirrubina Total

0,9 (0,6 – 1,0)

0,6 (0,6 – 0,9)

(

mg/dl)

ꢀSH, sobrecarga de hierro; TG, triglicéridos; CT, colesterol total;

VLDL, lipoproteína de muy baja densidad; LDL, lipoproteína

de baja densidad; HDL, lipoproteína de alta densidad; apo,

apolipoproteína; NS, no signiﬁcativo. Los resultados están

expresados como media ± desvío estándar (DE) o mediana

(

Q1-Q3) para variables con distribución paramétrica y no pa-

ꢀ

Distribución de las mutaciones del gen HFE en los 37 pacien-

ramétrica, respectivamente.

tes con SH. SH, sobrecarga de hierro. Wt, wild type

ByPC 2016;80(3):10-17.